ЛУЧШИЕ УМЫ ДВАЧА - ОБЪЕДИНЯЙТЕСЬЗаметил такую вещь, что в /b/ всегда найдутся умники, которые будут усираться и доказывать что разбираются в чем-то лучше тебя, даже если эта область - твой хлеб. Сегодня я дам всем ученым двача возможность проявить себя во всей красе:Удивительные бактерии были найдены в антарктическом подледном озере. Они хорошо чувствуют себя при температурах ниже нуля благодаря особому антифриз-белку, который до этого не был изучен. Расскажите, каким образом вы изолировали бы этот белок и экспериментально подтвердили, что именно он ответственен за незамерзаемость бактерий?Даю подсказку внизу под спойлером. Воспользовался ей или гуглом - ачивменты заблокированы. Правильных ответов может быть несколько. Один из них я озвучу на 300 посте. Если кто-то даст один из правильных ответов, я тут же отпишу об этом.Этот белок присоединяется к крошечным кристаллам льда, не давая им сливаться в большие кристаллы и нарушать целостность бактерии
Всегда забавляло, что на дваче тред не может взлететь сразу, нужно его РАЗБАМПАТЬ блять, а еще посеменить обязательно
Ученые, кто юзает куклу? Чому она не выделяет ответы на мои посты? Не удобно же нихуя. В настройках не нашел как это исправить.
Серьезно, какого хуя я бампаю и тут же смотрю нулевую, а там треда нет нихуя? Нулевая не обновляется после каждого поста? Пиздец.
бамп
>>138920638>ПикА комплюхтер куда ставить?
>>138920767Если согласен жить в такой конуре, то и против ноутбука не должен быть.
>>138920865Эта конура лучше, чем 90% квартир в коммиблоках.
>>138920381 (OP)Провел бы экспиремент в котором бы подвергал бактерии постоянной заморозкой
>>138921002Дальше что?
>>138921031Они б замерзли.
Пользуйтесь моей подсказкой, в условиях такого нет:Этот белок присоединяется к крошечным кристаллам льда, не давая им сливаться в большие кристаллы и нарушать целостность бактерии
ОП хуй, я явно лучше разбираюсь в любом вопросе.
Ты у нас с биофака, опчик?
>>138920381 (OP)А давайте из этого треда сделаем цуиь!
>>138921031Дальше бы взял на экспертизу эти мини кристаллы, нашел бы там этот белок. сугубо с дивана
>>138921227Я эксперт в области цуиь!
>>138921227Нельзя! Мы должны докапаться до истины
>>138921259На трёхсотом посте докапаемся
>>138921259Ни в коем случае
>>138921283
>>138920381 (OP)>Они хорошо чувствуют себя при температурах ниже нуляКакого хуя? Температуры ниже нуля это же что-то из области квантовой механики и не встречаются в природе.
Есть вебм, где лежит нарисованная тёлка с голубыми волосами, а на фоне играет песня?
>>138921281Вот если бы оп написал что на 300 посту предаставит пруфы самовыпила то мотивации на решение было бы больше.
>>138920381 (OP)Тред не доживёт до 300-того поста./thread.
>>138921330
>>138921342Потому что дващеры тупые?
>>138921380Потому что это теперь цуиь тред!
>>138921324Ойбай, посмотрите на него, как он выебывается. Ты и в повседневной жизни кельвинами пользуешься?
Ладно, беру хуй, на него кладу бактерию, с одного размаха засовываю хуй за щеку твоей мамки, если бактерия не упала то ты пидор.
>>138921407
>>138921407Ну норм норм
>>138921416Вопрос то к ученым, а не к быдлу вроде тебя. А ученые пользуются кельвинами.
>>138921438Спасибо аноне, я знал, что ты оценишь)
Им холодно, они держатся вместе
>>138921472:*
>>138921424Новый положняк в треде
>>138920381 (OP)В белках я конечно не разбираюсь, потому затирать не стану. Но насчёт поддержания температуры, ящитаю что бактерии должны активно питаться, чтобы выделялось больше энергии.
>>138921603
>>138921747
>>138920381 (OP)На всё воля божья.
>>138920767убрать диван, туда комплюхтер. социоблядь што ле? зачем диван нужен
>>138921970Я бы лучше кровать убрал - она больше места занимает. Туда воткнул бы большой ЖК-3D телек с охуенной акустикой. Диван поставил бы в центр комнаты, а стол с комплюхетром туда, где стоял диван.
>>138920767вместо ебучего комода, зачем он нужен, если есть гардероб?
Первое что приходит в голову: извлечь общий белок из культуры и разогнать электрофорезом. Каждую фракцию в отдельную лунку платы, плату в морозилку. В лунке, где не будет кристаллов и есть целевой белок
Криопротекторы всякие вырабатывают, глицерином срут.
Разложить лед с бактерияи на хроматографе/массспектрометре.Разобрать что они жрут и что срут. Какой газ выделяют.Исходя из того что они потребляют и что в выделяют прикинуть химические реакции в клетке на основе типичных циклов.Сделать выжимки из культур бактерии и опять таки в хромотограф, тонкослойной хромотографией определить ферменты.Когда все это проделаешь поймешь как у этих бактерии шестеренки крутятся, какие у них там циклы и что у них за криопротектор.
>>138921416Ты такой умный. Давай встречаться
>>138920381 (OP)сначала научитьсяих культивировать; затем проверить выделют ли они белок в среду, или он в них(ну там заморозить и смотреть на процесс кристаллообразования); если в них - ультразвуком разрушаем оболочку ну или СМС; пробуем высахивать белковые фракции; ну там спиртом к примеру; иль сулфатом аммония; чекаем не денантурируется ли; фракции белковые - на гель электрофарез там для разделения; ну типа потом чекаем какои именно белок нам интересен;ебёмся с выращиваем кристалла для РСА; както так наверное
Еще можно методом накаута выделить ген отвечающий за этот белок и привить какой другой бактерии выделяющей, например, аммиак.И засадить этой бактерией полюса.И пизда нашей цивилизации ебаной.
Весь мир в труху.
>>138920381 (OP)сория, я сначала думал что типа они заморозку выносят хорошо, и типа лед клетки рвать не должен; если как антифриз - то наверное просто температуру замерзания чекать надо; я таки думаю он будет не понижать температуру замерзания в основном, а способствовать переохлаждению; ну можно ещё ГМО палочку закуячить E.Coli какуюнить мутящую белок этот, и чекнуть на скорость размножения при низких температурах там; белок если низкомолекулярный - то наверное и хроматографией разделить можно
>>138920638Какого хуя, блядь, чё за бред. Ну нахуя в сортир в одной комнате с ванной, а раковина в отдельной комнате блядь, зачем? Каким над быть отбитым, чтоб такую хуйню придумать сука, унитаз должен стоять в отдельном дристальном зале, а вання с раковиной в ванной блядь, ёбаныйрот блядь пиздец, сука, разве до этого так сложно додуматься?
>>138920381 (OP)>>>Этот белок присоединяется к крошечным кристаллам льда, не давая им сливаться в большие кристаллы и нарушать целостность бактерии>>138928759>>138929064хотя чекнул спойлер - таки всётаки с кристаллами воды рвущими органеллы связана активность белка
а собственно оп ещё здесь?
>>138929524Биолог?
>>138929564не, химик-органик, то есть пытался им стать
>>138929597>химик-органикСуровый вы человек.
Заблокировать синтез белка и увидеть, что бактерии сдохнут
чому треде не взлетает; интересный жи :`( ОП как всегда съебался?
>>138931706Я здесь, сижу ридонли, жду Прометея от двача.
>>138931866>>138928759>>138929064>>138929274ну а мой чё не годный метод?
>>138920381 (OP)Я знаю! Мне кажется, что... Этот белок присоединяется к крошечным кристаллам льда, не давая им сливаться в большие кристаллы и нарушать целостность бактерии
>>138931866ГДЕ МОЙ ПРИЗ?
Нанороботов бы пустил, которые поштучно этот белок собирали.
>>138920381 (OP)Они не правы и несут хуйню.
>>138931866хуле не отвечаешь то?
>>138931866или это твой школьный проект? и ты ждешь пока тебе принесут решение?
>>138920381 (OP)Рыгнул в тред
>>138920381 (OP)Чет скучно у вас тут
>>138920381 (OP)Сагану аметиста ебаного пожалуй
>>138920381 (OP)>пук
>>138920381 (OP)Я бы короче снял 2 напаса, а потом позвонил бы и нанял биолога
ОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидору
ОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидору
ОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидору[/bОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидору[/ОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудаОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пиОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; по
ОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидоруОП-мудак с завышенным самомнение; поссал защеку пидору
Ты нахуя сагаешь дохлый тред?
>>138920381 (OP)С помощью CRISPR/CAS9 удалить из генома етот белок, без него бактерия замерзнет. profit
>>138920381 (OP)>Расскажите, каким образом вы изолировали бы этот белок и экспериментально подтвердили, что именно он ответственен за незамерзаемость бактерий?Бля вопрос задан - "как изолировать и доказать что именно этот белок не дает появляться льду" а в подсказке указан механизм работы белка, охуенно ОП, охуенно
>>138937702> CRISPR/CAS9 да ты смотри, здесь даже школьники подписаные на умные паблики сидятCRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9 CRISPR/CAS9
>>138937694OTYEBIS YOBA
>>138938328Проиграл с тебя
Uniprot Swissprot Chembl Description Number SharedTRPV1_HUMAN Q8NER1 CHEMBL4794 Vanilloid Receptor, Human 250TRPV2_RAT Q9WUD2 CHEMBL2863 Transient Receptor Potential Cation Channel Subfamily V Member 2, Rat 144TRPV4_RAT Q9ERZ8 CHEMBL2775 Transient Receptor Potential Cation Channel Subfamily V Member 4, Rat 144Z50512 Z50512 CHEMBL369 Cavia Porcellus 13Z50597 Z50597 CHEMBL376 Rattus Norvegicus 12Z80088 Z80088 CHEMBL613853 CHO (Ovarian Cells) 9NMDE1_RAT Q00959 CHEMBL310 Glutamate [NMDA] Receptor Subunit Epsilon 1, Rat 3NMDZ1_RAT P35439 CHEMBL330 Glutamate (NMDA) Receptor Subunit Zeta 1, Rat 3Z50425 Z50425 CHEMBL364 Plasmodium Falciparum 25HT1A_HUMAN P08908 CHEMBL214 Serotonin 1a (5-HT1a) Receptor, Human 15HT1A_RAT P19327 CHEMBL273 Serotonin 1a (5-HT1a) Receptor, Rat 15HT2A_RAT P14842 CHEMBL322 Serotonin 2a (5-HT2a) Receptor, Rat 15HT2B_HUMAN P41595 CHEMBL1833 Serotonin 2b (5-HT2b) Receptor, Human 15HT2B_RAT P30994 CHEMBL323 Serotonin 2b (5-HT2b) Receptor, Rat 15HT2C_HUMAN P28335 CHEMBL225 Serotonin 2c (5-HT2c) Receptor, Human 15HT2C_RAT P08909 CHEMBL324 Serotonin 2c (5-HT2c) Receptor, Rat 15HT6R_HUMAN P50406 CHEMBL3371 Serotonin 6 (5-HT6) Receptor, Human 15HT7R_HUMAN P34969 CHEMBL3155 Serotonin 7 (5-HT7) Receptor, Human 15HT7R_RAT P32305 CHEMBL3223 Serotonin 7 (5-HT7) Receptor, Rat 1ADCY2_RAT P26769 CHEMBL2958 Adenylate Cyclase Type II, Rat 1ADCY3_RAT P21932 CHEMBL4864 Adenylate Cyclase Type III, Rat 1ADCY4_RAT P26770 CHEMBL2879 Adenylate Cyclase Type IV, Rat 1ADCY5_RAT Q04400 CHEMBL2880 Adenylate Cyclase Type V, Rat 1ADCY6_RAT Q03343 CHEMBL2975 Adenylate Cyclase Type VI, Rat 1ADCY8_RAT P40146 CHEMBL3082 Adenylate Cyclase Type VIII, Rat 1CALM_HUMAN P62158 CHEMBL6093 Calmodulin, Human 1CNR1_HUMAN P21554 CHEMBL218 Cannabinoid CB1 Receptor, Human 1CNR1_MOUSE P47746 CHEMBL3037 Cannabinoid CB1 Receptor, Mouse 1CNR1_RAT P20272 CHEMBL3571 Cannabinoid CB1 Receptor, Rat 1CNR2_HUMAN P34972 CHEMBL253 Cannabinoid CB2 Receptor, Human 1CNR2_MOUSE P47936 CHEMBL5373 Cannabinoid CB2 Receptor, Mouse 1CNR2_RAT Q9QZN9 CHEMBL2470 Cannabinoid CB2 Receptor, Rat 1D4A3N4_RAT D4A3N4 CHEMBL2679 Brain Adenylate Cyclase 1, Rat 1DRD1_BOVIN Q95136 CHEMBL2967 Dopamine D1 Receptor, Bovin 1DRD1_HUMAN P21728 CHEMBL2056 Dopamine D1 Receptor, Human 1DRD1_RAT P18901 CHEMBL265 Dopamine D1 Receptor, Rat 1DRD2_BOVIN P20288 CHEMBL3998 Dopamine D2 Receptor, Bovin 1DRD2_HUMAN P14416 CHEMBL217 Dopamine D2 Receptor, Human 1DRD2_RAT P61169 CHEMBL339 Dopamine D2 Receptor, Rat 1DRD3_HUMAN P35462 CHEMBL234 Dopamine D3 Receptor, Human 1DRD3_RAT P19020 CHEMBL3138 Dopamine D3 Receptor, Rat 1DRD4_HUMAN P21917 CHEMBL219 Dopamine D4 Receptor, Human 1DRD4_RAT P30729 CHEMBL3361 Dopamine D4 Receptor, Rat 1DRD5_HUMAN P21918 CHEMBL1850 Dopamine D5 Receptor, Human 1DRD5_RAT P25115 CHEMBL2281 Dopamine D5 Receptor, Rat 1FAAH1_HUMAN O00519 CHEMBL2243 Anandamide Amidohydrolase, Human 1FAAH1_RAT P97612 CHEMBL3229 Anandamide Amidohydrolase, Rat 1HRH1_HUMAN P35367 CHEMBL231 Histamine H1 Receptor, Human 1KCNH2_HUMAN Q12809 CHEMBL240 HERG, Human 1MDR1_HUMAN P08183 CHEMBL4302 P-glycoprotein 1, Human 1MK03_HUMAN P27361 CHEMBL3385 MAP Kinase ERK1, Human 1NMD3A_HUMAN Q8TCU5 CHEMBL4787 Glutamate [NMDA] Receptor Subunit 3A, Human 1NMD3B_HUMAN O60391 CHEMBL2913 Glutamate [NMDA] Receptor Subunit 3B, Human 1NMDE1_HUMAN Q12879 CHEMBL1972 Glutamate [NMDA] Receptor Subunit Epsilon 1, Human 1NMDE2_HUMAN Q13224 CHEMBL1904 Glutamate [NMDA] Receptor Subunit Epsilon 2, Human 1NMDE3_HUMAN Q14957 CHEMBL4109 Glutamate [NMDA] Receptor Subunit Epsilon 3, Human 1NMDE4_HUMAN O15399 CHEMBL2591 Glutamate [NMDA] Receptor Subunit Epsilon 4, Human 1NMDZ1_HUMAN Q05586 CHEMBL2015 Glutamate (NMDA) Receptor Subunit Zeta 1, Human 1PDR5_YEAST P33302 CHEMBL1697658 Pleiotropic ABC Efflux Transporter Of Multiple Drugs, Yeast 1PGH1_HUMAN P23219 CHEMBL221 Cyclooxygenase-1, Human 1PRIO_HUMAN P04156 CHEMBL4869 Prion Protein, Human 1Q8CFM9_RAT Q8CFM9 CHEMBL3940 Adenylate Cyclase Type VII, Rat 1SCN1A_HUMAN P35498 CHEMBL1845 Sodium Channel Protein Type I Alpha Subunit, Human 1SCN2A_HUMAN Q99250 CHEMBL4187 Sodium Channel Protein Type II Alpha Subunit, Human 1SCN3A_HUMAN Q9NY46 CHEMBL5163 Sodium Channel Protein Type III Alpha Subunit, Human 1SCN8A_HUMAN Q9UQD0 CHEMBL5202 Sodium Channel Protein Type VIII Alpha Subunit, Human 1TRPA1_HUMAN O75762 CHEMBL6007 Transient Receptor Potential Cation Channel Subfamily A Member 1, Human 1TRPV1_CAVPO Q6R5A3 CHEMBL5132 Vanilloid Receptor 1, Guinea Pig 1TYTR_TRYCR P28593 CHEMBL5131 Trypanothione Reductase, Trycr 1Z101682 Z101682 CHEMBL613915 BK Polyomavirus 1Z102380 Z102380 CHEMBL613680 Ileum 1Z104302 Z104302 CHEMBL1907608 Glutamate NMDA Receptor 1Z104303 Z104303 CHEMBL1907609 Muscarinic Acetylcholine Receptor 1Z104304 Z104304 CHEMBL1907610 Adrenergic Receptor Alpha-1 1Z50636 Z50636 CHEMBL613725 Sindbis Virus
RKEYVAS MVFSLAMGWT 560 570 580 590 610 62 690 700ENYDFKAVFI ILLLAYVILT YILLLNMLIA LMGETVNKIA QESKNIWKLQ 710 720 730 740 750RAITILDTEK SFLKCMRKAF RSGKLLQVGF TPDGKDDYRW CFRVDEVNWT 760 770 780 790 800TWNTNVGIIN EDPGNCEGVK RTLSFSLRSG RVSGRNWKNF ALVPLLRDAS 810 820 830 TRDRHATQQE EVQLKHYTGS LKPEDAEVFK DSMVPGEK 810 820 830 TRDRHATQQE EVQLKHYTGS LKPEDAEVFK DSMVPGEK
16 and name HA )(resid 16 and name HB1 ) 0.00 0.00 2.87assign (resid 16 and name HA )(resid 16 and name HB ) 0.00 0.00 2.62assign (resid 16 and name HA )(resid 16 and name HD1 ) 0.00 0.00 3.98assign (resid 16 and name HA )(resid 16 and name HE3 ) 0.00 0.00 4.79assign (resid 16 and name HB2 )(resid 16 and name HE3 ) 0.00 0.00 4.11assign (resid 16 and name HB1 )(resid 16 and name HE3 ) 0.00 0.00 4.11assign (resid 16 and name HB )(resid 16 and name HZ3 ) 0.00 0.00 5.92assign (resid 17 and name HN )(resid 17 and name HB ) 0.00 0.00 3.65assign (resid 17 and name HN )(resid 17 and name HD ) 0.00 0.00 6.98assign (resid 17 and name HA )(resid 17 and name HG ) 0.00 0.00 2.56assign (resid 17 and name HA )(resid 17 and name HD1 ) 0.00 0.00 4.39assign (resid 17 and name HA )(resid 17 and name HD2 ) 0.00 0.00 4.39assign (resid 18 and name HN )(resid 18 and name HB2 ) 0.00 0.00 3.45assign (resid 18 and name HN )(resid 18 and name HB1 ) 0.00 0.00 3.45assign (resid 18 and name HN )(resid 18 and name HB ) 0.00 0.00 2.94assign (resid 18 and name HN )(resid 18 and name HD2 ) 0.00 0.00 5.50assign (resid 18 and name HA )(resid 18 and name HB2 ) 0.00 0.00 2.90assign (resid 18 and name HA )(resid 18 and name HB1 ) 0.00 0.00 2.90assign (resid 18 and name HA )(resid 18 and name HD2 ) 0.00 0.00 4.69assign (resid 19 and name HN )(resid 19 and name HB2 ) 0.00 0.00 3.17assign (resid 19 and name HN )(resid 19 and name HB1 ) 0.00 0.00 3.17assign (resid 19 and name HN )(resid 19 and name HB ) 0.00 0.00 2.99assign (resid 20 and name HN )(resid 20 and name HB ) 0.00 0.00 3.64assign (resid 20 and name HN )(resid 20 and name HG ) 0.00 0.00 3.48assign (resid 20 and name HA )(resid 20 and name HG ) 0.00 0.00 3.61assign (resid 22 and name HN )(resid 22 and name HB ) 0.00 0.00 3.64assign (resid 23 and name HN )(resid 23 and name HB2 ) 0.00 0.00 3.76assign (resid 23 and name HN )(resid 23 and name HB1 ) 0.00 0.00 3.76assign (resid 23 and name HN )(resid 23 and name HB ) 0.00 0.00 3.46assign (resid 23 and name HN )(resid 23 and name HG ) 0.00 0.00 4.64assign (resid 23 and name HA )(resid 23 and name HG ) 0.00 0.00 3.78assign (resid 24 and name HN )(resid 24 and name HB ) 0.00 0.00 3.14assign (resid 24 and name HN )(resid 24 and name HG12 ) 0.00 0.00 4.45assign (resid 24 and name HN )(resid 24 and name HG11 ) 0.00 0.00 4.45assign (resid 24 and name HN )(resid 24 and name HG1 ) 0.00 0.00 4.26assign (resid 24 and name HN )(resid 24 and name HG1 ) 0.00 0.00 4.26assign (resid 24 and name HN )(resid 24 and name HD ) 0.00 0.00 5.75assign (resid 26 and name HN )(resid 26 and name HB2 ) 0.00 0.00 3.42assign (resid 26 and name HN )(resid 26 and name HB1 ) 0.00 0.00 3.42assign (resid 26 and name HN )(resid 26 and name HB ) 0.00 0.00 3.18assign (resid 26 and name HN )(resid 26 and name HG ) 0.00 0.00 4.30assign (resid 26 and name HA )(resid 26 and name HG ) 0.00 0.00 3.72assign (resid 26 and name HB2 )(resid 26 and name HZ1 ) 0.00 0.00 5.50assign (resid 26 and name HB1 )(resid 26 and name HZ1 ) 0.00 0.00 5.50assign (resid 26 and name HB )(resid 26 and name HZ1 ) 0.00 0.00 5.31assign (resid 26 and name HG* )(resid 26 and name HZ1 ) 0.00 0.00 4.18assi
Percent inhibition of 22Na+ uptake by voltage sensitive sodium channel of rat cortical synaptosomes at 100 uM Scientific Literature Rattus norvegicus PROTEIN FAMILY Sodium channel alpha subunits; brain (Types I, II, III) Rattus norvegicus J. Med. Chem., (1999) 42:14:2582CHEMBL1068252.27 Inhibition = 50.2 % F Percent inhibition of 22Na+ uptake by voltage sensitive sodium channel of rat cortical synaptosomes at 100 uM Scientific Literature Rattus norvegicus PROTEIN FAMILY Sodium channel alpha subunits; brain (Types I, II, III) Rattus norvegicus J. Med. Chem., (1999) 42:14:2582CHEMBL315644296.32 Inhibition = 61.8 % F Percent inhibition of 22Na+ uptake by voltage sensitive sodium channel of rat cortical synaptosomes at 100 uM Scientific Literature Rattus norvegicus PROTEIN FAMILY Sodium channel alpha subunits; brain (Types I, II, III) Rattus norvegicus J. Med. Chem., (1999) 42:14:2582CHEMBL87992296.32 Inhibition < 73.4 % F Percent inhibition of 22Na+ uptake by voltage sensitive sodium channel of rat cortical synaptosomes at 100 uM
knowledge.Knowledge of the structure of scorpion toxins thatbind to K+ channels is useful for gaining insights intothe structure of the complementary surface on the ionchannel to which the toxin binds (Hidalgo and MacKinnon1995; Gross and MacKinnon 1996; Lanigan et al.2002). Recently, a number of toxins have been identifiedthat bind to the outer pore region of HERG (Coronaet al. 2002); so there is considerable interest in determiningthe structures of these toxins. Korolkova andcolleagues have recently reported the structure ofBeKm-1 (Korolkova et al. 2002), and our group hasrecently solved the structure of CnErg1 (formerly knownas Ergtoxin) (Torres et al. 2003) (see Fig. 5). Both toxinsadopt the common a/b motif displayed by many K+channel scorpion toxins; the overall structure consists ofa triple-stranded b-sheet and an a-helix. Preliminarymutagenesis studies on BeKm-1 indicate that residuesE9, Y11, F14, and K18, which all lie along the alphahelix are critical for binding to HERG (Korolkova et al.2003). There are no data available yet with regard towhich residues on Ergtoxin are critical for binding.Nevertheless, scanning cysteine mutagenesis of the S5-Plinker in HERG has identified several residues that areimportant for binding the toxin; these include threehydrophobic residues in a putative amphipathic helix in
inward rectifier K+channel family, Kir6.x, contain a GFG selectivity filterand also undergo a rapid gating process that is analogousto C-type inactivation (Proks et al. 2001). Furthermore,in Kir6.2, when the phenylalanine is mutatedto tyrosine the channel is non-functional indicating thatthis residue is crucial for the functional conformation ofthe pore region of the channel (Proks et al. 2001).It is therefore likely that the presence of a phenylalaninein the selectivity filter of HERG and the lack oftryptophan residues in the pore-helix of HERG resultsin a ‘‘weaker spring’’ holding the selectivity filter in thecorrect conformation (Fan et al. 1999). However, thishypothesis needs to be tested directly by experiment.Voltage-dependence of inactivationThe intrinsic voltage dependence of inactivation ofHERG implies that there must be an inactivation‘‘voltage sensor’’, i.e., a region of the protein that movesas a consequence of changes in the electric field acrossthe membrane and is coupled to ‘‘collapse of the pore’’.Two recent studies have provided direct evidence thatvoltage-dependent changes in protein structure occur inHERG on a time scale that is consistent with the timescale of inactivation. First, Smith and Yellen (2002)showed, using FRET measurements, that fluorescentgroups attached to the NH2 end of S4 led to movementson the millisecond time scale and in a voltage rangesimilar to inactivation. Second, Piper et al. (2003)showed that a small component of gating current occurson a millisecond time scale. However the voltagedependence of this rapid component of gating chargemovement does not correspond to the voltage dependenceof inactivation (Piper et al. 2003). Thus it wouldappear that there are structural rearrangements occurringon an appropriate timescale but the precise natureof the voltage sensor still needs to be defined.The FRET experiments noted above suggest that thevoltage sensor for inactivation involves conformationalchanges that occur near the extracellular end of S4(Smith and Yellen 2002). The simplest explanation forthis is that S4 itself acts as the voltage sensor for bothactivation and inactivation. Alternatively, it is possiblethat the charged residues that move in response tochanges in voltage are in regions of the protein that areclose to the extracellular end of S4 in the native structure;this could, for example, include some of thecharged residues in the extracellular linker between S5and the pore helix. Many of the charged residues in thisregion are likely to be too far from the membrane to beable to detect changes in the transmembrane electricalfield; however, it is possible that at least some will lieclose enough to detect changes in the membrane potential.Mutations of charged residues in this region haveresulted in non-functional channels (e.g., K595C),channels which do not inactivate (e.g., D591C), orchannels with unaltered inactivation (e.g., D580C) (Liuet al. 2002). These data suggest that some of the chargedresidues in the S5P linker may well be important for thevoltage dependence of inactivation but more work isneeded to test the hypothesis.Intriguingly some of the most interesting resultsconcerning the voltage sensitivity of HERG inactivationcome from studies of non-charged residues in the outerpore region. In particular mutations of two adjacentresidues, S631A and V630L. S631A results in an+100 mV shift in the mid-point of steady-state inactivation(Zou et al. 1999) while V630L channels are nonfunctionalbut when co-expressed with wild type (WT)channels they result in channels with a )22 mV shift inthe mid-point of steady-state inactivation (Nakajimaet al. 1998). On the other hand, the more conservativemutation V630I does not affect inactivation (Schonherrand Heinemann 1996). V630 and S631 lie immediatelyextracellular to the selectivity filter (VGFGNVS). Thelikely explanation for the effects of V630 and S631mutations on the voltage sensitivity of inactivation isthat the conformational changes that occur duringinactivation involves rearrangement of S631 and V630;and subtle mutations that alter the structure in this regionaffect the transduction of the message from theinactivation voltage sensor to the pore.Structural studies of HERG K+ channel toxinsMutagenesis studies, as with all ion channels, have beenvery informative with respect to general ideas aboutthe structure of HERG. However, answers to many ofthe questions we have posed regarding the basis of theunusual kinetics of HERG will only come from atomicresolution structural information. The crystal structureof KcsA, has a pore region that appears to be homologouswith the pore region of HERG (Doyle et al. 1998);thus KcsA is a very useful template for constructingmodels of the HERG pore (Mitcheson et al. 2001). Themodels have proven very helpful in defining how drugsbind to the pore of HERG (Mitcheson et al. 2001).Howeve
Table 1 Binding affinities of AE9C90CB, tolterodine, oxybutynin, solifenacin and darifenacin at human recombinant muscarinic receptorsubtypesCompound pKiM1 M2 M3 M4 M5AE9C90CB 9.7 0.11 8.6 0.02# 9.9 0.11 9.5 0.05 9.5 0.08Tolterodine 8.7 0.17 8.4 0.13 8.4 0.17 8.4 0.07 8.8 0.15Oxybutynin 8.6 0.01 8.1 0.09# 8.8 0.15 8.7 0.04 7.9 0.04Solifenacin 7.6 0.02 7.1 0.1# 7.7 0.04 6.8 0.08 7.2 0.06Darifenacin 7.5 0.04 7.2 0.03# 8.6 0.08 7.3 0.07 7.9 0.03Data are expressed as mean SEM of five experiments.*P < 0.01, significantly different from corresponding values for pKi of AE9C90CB at each receptor subtype versus pKi of tolterodine, oxybutynin, darifenacin andsolifenacin.#P < 0.01. significantly different from pKi at M3 receptor for each compound.Table 2 Selectivity of A
AE9C90CB (n = 16) 9.13 0.12Tolterodine (n = 16) 8.67 0.08Oxybutynin (n = 13) 9.05 0.19Solifenacin (n = 8) 7.94 0.09Darifenacin (n = 7) 8.55 0.15Functional antagonism is expressed as pKB (mean SEM); n, number ofexperiments.(P < 0.05) significantly different from value for AE9C90CB tolterodine; comparativepotency ratio of AE9C90CB versus tolterodine: 3; comparative potencyratio of AE9C90CB versus oxybutynin: 1; comparative potency ratio ofAE9C90CB versus solifenacin: 15; comparative potency ratio of AE9C90CBversus darifenacin: 4. Relative CNS occupancy (%)05101520253035400.9139358AE9C90CBTolterodineSolifenacinOxybutyninDarifenacinFigure 2 Relative CNS occupancy of muscarinic receptors was calculatedas the ratio of binding of [3H] NMS in brain homogenate andplasma samples taken 30 min after in vivo injection of drug. Eachgroup had eight animals.Table 4 Basal values of carbachol-induced changes in anaesthetizedrabbitsTreatment group Number ofanimalsIntravesicularpressure (cm H2O)Salivation (g)Vehicle 5 9.1 0.8 0.6 0.1Oxybutynin 6 9.5 0.8 0.5 0.1Tolterodine 6 10.1 1.0 0.7 0.1Solifenacin 5 10.2 0.4 0.5 0.1Darifenacin 6 9.8 1.2 0.5 0.1AE9C90CB 6 9.3 1.4 0.5 0.1
and 5. AE9C90CB, darifenacin and solifenacin were morepotent in inhibiting the carbachol-induced increase in intravesicalpressure than the carbachol-evoked salivation (Table 5,Figure 3A,D,E). However, oxybutynin was more potent ininhibiting the effect on salivation (Table 5, Figure 3B),whereas tolterodine showed equal potency in the inhibitionof either effect (Table 5, Figure 3C).From these data, the bladder versus salivary gland selectivity(essentially the ratio of the corresponding ED50 values) washighest for AE9C90CB. As oxybutynin is commonly used inpatients, this organ selectivity can also be expressed relative tothat of oxybutynin, and such comparison (Table 5, lastcolumn) showed that although all the newer agents weremore organ selective than oxybutynin, AE9C90CB was stillthe most selective for bladder versus salivary glan